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组织TUNEL染色
    发布时间: 2021-11-21 09:23    

细胞凋亡中染色体DNA断裂是个渐进的分阶段的过程,染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300kb的大片段。然后大约30%的染色体DNA在Ca²和Mg²依赖的核酸内切酶作用下,在核小体单位之间被随机切断,形成180~200bp核小体DNA多聚体。DNA双链断裂或只要一条链上出现缺口而产生的一系列DNA的3´-OH末端可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸化酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3´-末端,从而可进行凋亡细胞的检测,这类方法一般称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)。由于正常的或正在增值的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3´-OH形成,很少能够被染色。


组织TUNEL染色

实验步骤

1、石蜡切片脱蜡至水;

2、蛋白酶K修复;

3、破膜液破膜至通透,放置室温平衡;

4、孵育tunel反应液,使用DAPI复染细胞核;

5、使用抗荧光素淬灭剂封片;

6、最后进行显微镜镜检,图像采集分析。

 

实验结果及分析

DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色,TUNEL试剂盒为CY3荧光素标记,阳性凋亡细胞核为红色。