tangyuan biotech
棠源生物
company news 
新闻资讯
所在的位置:
不会做实验,有技术问题怎么办?
来源: | 作者:佚名 | 发布时间: 2021-11-13 | 710 次浏览 | 分享到:

棠源医学特设动物实验平台,为广大科研人员提供优质的实验动物。设有实验技术指导平台,为广大科研小白提供一对一辅导,让科研小白逐渐成长。

 

原代培养:

原代培养,是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此,较为严格地说是指成功传代之前的培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质,如果是正常细胞,仍然保留二倍体数,但实际上,通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。最常用的原代培养有组织块培养和分散细胞培养。

 

细胞传代:

传代培养,当原代培养成功以后,随着培养时间的延长和细胞不断分裂,一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制,生长速度减慢甚至停止;另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。此时就需要将培养物分割成小的部分,重新接种到另外的培养器皿(瓶)内,再进行培养。这个过程就称为传代(passage)或者再培养(subculture)。对单层贴壁细胞培养而言,80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。

 

PCR

PCR即多聚酶链式反应。反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。因此,无论是化石中的古生物、历史人物的残骸,还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液,只要能分离出一丁点的DNA,就能用PCR加以放大,进行比对。

 

Q-PCR

QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统,也叫实时定量基因扩增荧光检测系统,简称QPCR。基因扩增热循环仪+荧光仪+终点定量试剂,构成PCR-DNA终点法定量检测(End-point quantitative PCR detection),又分为终点酶免定量(End-point ELISA-PCR)和终点荧光定量(End-point Fluor-PCR)两种

 

Traswell侵袭实验:

细胞体外侵袭实验主要应用于肿瘤细胞侵袭和转移能力研究。该实验经常使用transwell plate通过matrigel穿膜侵袭实验来检测肿瘤细胞的侵袭潜能。

 

粘附实验

细胞黏附性是维持组织结构稳定的基本条件,也是细胞运动和发挥功能的调节因素,并且对细胞的增殖、分化有重要影响。通常可分为两类,即细胞与细胞黏附和细胞与基质黏附。机体内许多细胞,如上皮细胞,需要牢固地定在某处发挥功能;另一些细胞,如白细胞,活跃运动,就需要不断调节细胞黏附。细胞黏附性的改变在肿瘤转移过程中也发挥着重要作用。体外测定细胞粘附性实验方法的建立,为粘附分子的发现、细胞间粘附影响的研究提供了极为有效的方法。

 

划痕实验:

细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造,细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。

 

细胞增殖及毒性检测:

MTT或cck8试剂快速而准确的检测细胞增殖和细胞毒性。

1.细胞增殖测定:细胞增殖实验在很多领域都会用到,比如肿瘤相关、损伤后修复等。   

2.药物筛选:在测定一个药物的毒性和安全有效浓度时,经常会用到CCK-8。   

3.细胞毒性测定:各个处理因素对细胞活性和增殖的影响,比如在UV、低氧或者什么化学物品对细胞的影响上。  

4.肿瘤药敏试验:这个是用的比较广的,我见过做肿瘤的团队,买CCK-8都是一整箱,一整箱的买。

5.微生物对细胞的毒性或增殖的实验。

 

WB(蛋白电泳):

Westernblot法分为电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Western blot法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性,是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。

Western blotting 又称免疫印迹,从组织或细胞中提取的蛋白质进行聚丙乙烯酰胺电泳,再将胶中的蛋白质分子转移至硝酸纤维素(PVDF)膜上。利用被检测蛋白只能与标记的特异性抗体相结合,而这种结合不改变蛋白质在凝胶电泳中的相对分子量,特异性的抗体来检测蛋白质的成分。

 

ELISA

酶联免疫吸附实验(ELISA) 即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等,具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。

RNA提取:

Trizol是一种总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速裂解细胞,抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。

 

DNA提取:

DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有硅质材料、阴离子交换树脂等。

 

蛋白提取:

蛋白质(protein)是生命的物质基础,是有机大分子,是构成细胞的基本有机物,是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。

实验中多涉及到对细胞或者组织内的目的蛋白质提取,主要通过试剂RIPA+PMSF,在冰上裂解组织或细胞得到总蛋白。

 

流式细胞术:

流式细胞术所属现代词,指的是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒(如微球,细菌,小型模式生物等)逐个进行快速定量分析和分选的技术。

 

免疫组化:

免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

 

免疫沉淀:

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白,那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离,对B蛋白进行检测,进而证明两者间的相互作用。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的,符合体内实际情况,得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

 

HE染色:

免疫荧光(IF),是应用抗原与抗体特异性结合的原理,通过荧光标记抗体对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究。

 

原位杂交:

原位杂交技术(in situ hybridization)是以标记的核酸分子为探针,在组织细胞原位检测特异核酸分子的技术。使含有特异序列、经过标记的核酸单链即探针,在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交,再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测,从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。可检测 mRNA、microRNA、LncRNA、DNA,也可应用于各种种属来源的标本,包括哺乳动物、植物标本等,也可应用于组织芯片。

 

透射电镜&扫描电镜:

透射电子显微镜(transmission electron microscope,TSE)是利用透射电子成像,因而要求样品极薄厚度不能超100nm。其结构包括三大部分:电子学系统、真空系统和电子光学系统。

扫描电子显微镜 (scanning electron microscopy,SEM) 是利用聚焦的非常细的高能电子束在试样上扫描,激发出各种物理信息。通过对这些信息的接受、放大和显示成像,获得测试样表面形貌的观察。其结构由真空系统,电子束系统以及成像系统组成

 

动物实验平台:

动物疾病模型主要用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学(包括新药筛选)研究。人类疾病的发展十分复杂,临床积累的经验不仅在时间和空间上都存在局限性,而且在方法和道义上也受到限制。借助于动物模型的间接研究,可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不易排除的因素,以便更准确地观察模型的实验结果并与人类疾病进行比较研究,有助于更方便,更有效地认识人类疾病的发生发展规律,研究防治措施。